Глюкоза оксидазының глюкозасын анықтау әдісі

Әдістің принципі. Бұл әдіс глюкоза оксидазасы ферментінің әсер ету ерекшелігіне негізделген. Бұл фермент глюкозаны молекулалық оттегі қатысуымен тотықтырады, ол өздігінен глюкон қышқылына гидролизденеді. Глюкоза оксидаты сутегі асқын тотығын түзу үшін глюкозаны тотықтырады₂Әй₂) пероксидазаның әсерінен 4-аминоантипиринмен және фенолмен әрекеттеседі. Нәтижесінде қызғылт түсті қосылыс пайда болады, оның оптикалық тығыздығы 510 нм үлгідегі глюкоза концентрациясына пропорционалды.

глюкоза + O₂ + H₂Әй → глюкон қышқылы + H₂Әй₂

2 N₂Әй₂ + 4-аминоитипирин + фенол → хинонимин + 4Н₂Әй

Құрал-жабдықтар CPK, центрифуга, термостат, тіректер, пробиркалар, пипеткалар, биологиялық материал, жұмыс ерітіндісіндегі реагенттер.

тәжірибелік үлгі, мл

стандартты үлгі, мл

бос жұмыс сынағы (N₂O), мл

Глюкозаны калибрлеу ерітіндісі (анықтама)

Түтіктер термостатта 37 ° C температурада 15 минут инкубацияланады, содан кейін бос үлгіге (N) қалыңдығы 5 мм болатын кюветалардағы жасыл фильтрмен КҚК-де боялады.₂О). Инкубациядан кейін 1 сағат ішінде қызғылт түс тұрақты болады.

Есептеу глюкоза құрамы келесі формула бойынша шығарылады:

C =x С стандарты қайда

С - тәжірибелік үлгідегі глюкоза мөлшері, моль / л,

Эпоп - үлгінің оптикалық тығыздығы,

Жейді - калибрлеу үлгісінің оптикалық тығыздығы,

С стандарты - калибрлеу ерітіндісіндегі мазмұн, моль / л.

Қалыпты мәндер:  жаңа туылған нәрестелер - 2,8-4,4 ммоль / л

 балалар - 3,9 -5,8 ммоль / л

 ересектерде - 3,9 - 6,2 ммоль / л

Гипогликемия (ГГС).Қандағы глюкозаның жоғарылауы көптеген себептерге байланысты, соған сәйкес гипергликемияның екі тобы ажыратылады.

1. Инсуляр - ағзадағы инсулиннің жеткіліксіздігімен немесе оның әсерінің тиімсіздігімен байланысты.

2. Экстренсулярлы (экстраценарлы) - инсулиннің әсеріне тәуелді емес.

HHC түзуде келесі процестер маңызды болып табылады: гликогеннің ыдырауы, неоглюкогенездің жоғарылауы, гликоген синтезінің тежелуі, гормональды инсулин антагонистерінің әсерінен тіндік глюкозаның төмендеуі: соматотропин, глюкортикоидтар, тироксин, тиротропин.

Алиментарлық гипергликемия қандағы глюкозаның шамадан тыс түсуімен байқалады (мысалы, қант жүктемесі бар гипергликемия). «Гепатикалық» гипергликемия бауырдың диффузды зақымдануында болады.

Тұрақты және ауыр гипергликемия көбінесе қант диабетімен бірге жүреді. Инсулинге тәуелді қант диабеті мен инсулинге тәуелді емес қант диабетін немесе, тиісінше, I типті қант диабетін және II типті қант диабетін бөліп алу әдеттегі болып табылады. І типті қант диабетінің пайда болуы, ең алдымен, инсулин синтезі мен метаболизмінің бұзылуымен байланысты.

Гипергликемияның екінші тобы ең алдымен гормондар шығаратын эндокриндік бездердің гиперфункциясымен байланысты - инсулин антагонистері. Бұл Иценко-Кушинг синдромы мен ауруы, акромегалия, тиротоксикоз, феохромоцитома, глюкоганома сияқты ауруларда байқалады. Қан глюкозасының деңгейі бауырдың кейбір ауруларымен (атап айтқанда, бауыр циррозы бар пациенттердің 10-30%), гемохроматозмен (бауырдың пигментті циррозы, қола диабеті) жоғарылайды.

Гипогликемия (GPG) - қандағы глюкозаның төмендеуі - көбінесе қандағы инсулин деңгейінің абсолютті немесе салыстырмалы жоғарылауымен байланысты. Экстрапанкреатикалық гипогликемия жедел және созылмалы гепатит, цирроз, бауырдың өткір және субакутты дистрофиясы, алкогольмен улану, мышьякпен улану, фосформен улану, созылмалы обструктивті жұқпалы аурулардағы бауырдағы гликогенолиз және гликоногенез процестерінің ауырлығы арасындағы теңгерімсіздік нәтижесінде байқалады. . Қандағы глюкоза концентрациясының төмендеуі көбінесе өңештің қатерлі ісігі және асқазан безінен тыс локализацияның басқа қатерлі ісіктері бар науқастарда байқалады (фиброма, фибросаркома, нейрома), сондай-ақ жүктелмеген әйелдерде құсу, анорексия, бауыр диабеті, уремия, профилактикалық лактация және глюкозурия.

Гипогликемия психикалық жарақат, энцефалит, субарахноидты қан кету, ми ісігі салдарынан орталық болуы мүмкін.

1. Көмірсулардың асқорытуының мұрагерлік бұзылыстары.

2. Сізге гиперглюкоземияның қандай түрлері белгілі?

3. Патологиялық гиперглюкоземия себептері қандай?

4. Қант диабетінің инсулинге тәуелділігі қандай?

5. Тұқым қуалайтын аурулардың биохимиялық себептері қандай: а) гликогеноз? б) агликогеноз? в) фруктоземия? г) галактоземия?

6. Ораза кезінде көмірсулар алмасуының биохимиялық өзгерістері қандай?

7. Глюкозаға төзімділікті анықтау әдісі.

Глюкоза оксидазасы әдісі қашан тағайындалады?

Бұл тест қантқа төзімділікті және предабиетиттердің дамуын, сондай-ақ аурудың жоғарылауын анықтау үшін қолданылады. Бірақ мұндай мақсаттарда талдау сирек қолданылады, бұл оның жоғары құны мен нәтижені ұзақ күтуге байланысты. Көбінесе осы әдісті қолдана отырып, қандағы глюкозаны анықтау келесі ауруларды дифференциалды диагностикалауда қолданылады:

Қант бірден азаяды! Уақыт өте келе қант диабеті көптеген ауруларға әкелуі мүмкін, мысалы көру қабілеті, тері мен шаш жағдайы, ойық жаралар, гангрена және тіпті қатерлі ісік ісіктері! Адамдар қант деңгейін қалыпқа келтіру үшін ащы тәжірибені үйретті. ары қарай оқу.

• лактозаға төзбеушілік синдромы,
• фруктозаға төзбеушілік,
• дене сұйықтарымен фруктозаның секрециясы,
• зәрдегі пентозаның концентрациясының жоғарылауы.

Глюкоза оксидазын сынаудың сөзсіз артықшылығы - оның дәлдігі.

Бұл әдістің негізі неде?

Қандағы глюкозаның концентрациясын анықтаудың әртүрлі әдістері бар, бірақ глюкоза оксидазасы ең дәл болып табылады. Бұл қанттың атмосфералық оттегімен әрекеттесуі кезінде реагенттің тотығатындығына негізделген. Сутегі асқын тотығы ерітіндіге шығарылады. Бұл зат түсті қосылыс қалыптастыру үшін ортотолуидинмен әрекеттеседі. Бұл реакцияның жүруі үшін арнайы ферменттердің болуы қажет. Тотығу реакциясы кезінде глюкоза оксидазасы, ал сұйықтықты бояу кезінде пероксидаза болуы керек. Ерітіндінің түс қарқындылығы глюкозаның құрамына байланысты болады және оның жоғары мөлшері кезінде өте қарқынды болады.

Глюкоза оксидазын глюкозаны анықтаудың мәні

Нәтижені бағалау сол уақыт кезеңінен кейін фотометрияның сандық әдісін қолдану арқылы жүзеге асырылады. Міндетті түрде белгілі бір қант нормасы бар калибрлеу ерітіндісін қолдану қажет, содан бастап сіз дене сұйықтықтарындағы глюкозаның, көбінесе қандағы концентрациясына көз жеткізе аласыз.

Талдау қалай жүргізіледі?

Материал науқастан аш қарынға алынады. Сынақ үшін веноздық қан 5 мл мөлшерінде қолданылады. Диагноз қарсаңында науқасқа қатаң диета ұсынылады. Бұл нәтиженің сенімділігіне баға беруге және талдаудың қателіктерін болдырмауға мүмкіндік береді. Қан қабылдаудан 2 күн бұрын науқас алкоголь мен темекі шегудің жаман әдеттерінен бас тартуы керек. Сондай-ақ, шамадан тыс тәтті тағамдарды қабылдауды шектеу керек және мүмкін болған кезде стресстік жағдайлардан аулақ болу керек.

Қант қосылған плазманы алу үшін қан центрифугаланады.

Көбінесе глюкозаның концентрациясын анықтаудың бұл әдісі центрифугалау әдісімен жүзеге асырылады, оның құрамындағы элементтер оқшауланады. Қант мөлшері плазмада анықталған. Оған барлық қажетті реагенттер қосылған кезде, егер тест бөлме температурасында жүргізілсе, 20 минуттан кейін түс байқалады. Глюкозаны есептеу калибрлеу кестесіне сәйкес немесе порция ережесін қолдана отырып жүргізіледі.

Зерттеу реагенттері

Қантты анықтау үшін қандағы глюкозаны анықтаудың жедел әдістерін қолдану ыңғайлы. Бұл пайдаланудың қарапайымдылығына және жылдам нәтижеге байланысты. Сонымен қатар, науқасқа зертханаға немесе ауруханаға барудың қажеті жоқ. Бірақ глюкоза оксидазасын тексеруден айырмашылығы, мұндай диагноз сенімсіз. Себебі глюкозаны басқа қанттардан ажыратпайды және олардың концентрациясын бірге анықтайды.

Глюкоза оксидаза реакциясының негізіне 9% хлорид натрий және 50% мырыш сульфаты ерітіндісі жатады. Олар қанды центрифугалау сатысында қосылады. Сонымен қатар, сірке қышқылы мен натрий ацетаты бар буферлі ерітінді қолданылады. Титрлеу әдісі оның рН-ны 4,8 деңгейінде анықтайды. Осыдан кейін глюкоза оксидазасы қосылады, соның арқасында сутегі асқын тотығы мен пероксидаза шығады, олар дәл нәтиже алу үшін ерітінді қажетті концентрацияға бояуға қатысады.

Талдаудағы нормалар

Қантты өлшеу арнайы қондырғыларда жүзеге асырылады - ерітіндінің литріне миллимол.

Глюкоза оксидазасының қан анализі бос асқазанға өтіп, ол үшін плазма немесе сарысуды қолдану керек. Ересектер үшін оның мөлшері ерлер мен әйелдер үшін 3,3-5,5 құрайды. 15 жасқа дейінгі балалар үшін бұл көрсеткіш біршама төмен және 3.2-5.3 аралығында болады. Жаңа туылған нәрестелерде қандағы глюкоза 1,7-4,2 құрайды. Көрсеткіштердің жоғарылауы қант диабеті бар немесе глюкозаға төзімділіктің төмендеуі бар пациенттің дамуымен байқалады. Бұл жағдай - бұл предабиет, егер уақтылы емделмеген болса, ол жақын арада осы ауыр патологияның дамуына әкеледі.

Қант диабетін емдеу мүмкін еместей көрінеді ме?

Қазір сіз осы жолдарды оқып отырғаныңызға байланысты, жоғары қандағы қантпен күресте жеңіс әлі сіздің тарапыңызда емес.

Ауруханада емдеу туралы ойланып көрдіңіз бе? Бұл түсінікті, өйткені қант диабеті - өте қауіпті ауру, егер емделмеген болса, ол өлімге әкелуі мүмкін. Тұрақты шөлдеу, тез зәр шығару, бұлдыр көру. Барлық осы белгілер сізге жақсы таныс.

Бірақ әсерді емес, себепті емдеу мүмкін бе? Қазіргі диабеттің емі туралы мақаланы оқуды ұсынамыз. Мақаланы оқыңыз >>